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雷火亚洲电竞平台官网-KG-1A人急性骨髓白血病细胞系的培养步骤及应用!

2023-09-24


1、布景KG-1A人急性骨髓白血病细胞系是一种人类急性髓系白血病的细胞系,来历在中国医学科学院血液学研究所。该细胞系具有高度致死性、易发生耐药性和易产生突变等特点,是以在临床医治中利用较为有限。2、KG-1A人急性骨髓白血病细胞系具有以下特点1、来历:KG-1A细胞系是由中国医科年夜学从属第一病院的研究人员从中国健康人群平分离出来的,是以具有较高的亲缘关系和代表性。2、分化水平:KG-1A细胞系的分化水平较低,即原始造血干细胞程度,这使得它在体外培育时具有较强的增殖能力和抗凋亡能力。3、基因组特点:KG-1A细胞系具有较丰硕的基因突变,包罗常见的染色体易位、缺掉、插入等,这些突变成研究AML的份子机制供给了丰硕的资本。4、临床利用:因为KG-1A细胞系具有较强的体外发展能力和较好的体内移植潜力,是以在AML的根本研究和临床医治中具有主要价值。3、KG-1A人急性骨髓白血病细胞系培育步调1、预备培育基:利用含有葡萄糖、氨基酸、维生素和矿物资的LB(Luria-Bertani)培育基。将培育基插手高压灭菌器中进行雷火app下载官网灭菌,然后将其放入37°C、5%CO2的恒温培育箱中预热至37°C。2、搜集细胞样本:从患者体内收集骨髓或外周血样本,并依照尺度操作规程处置样本。凡是采取Ficoll-Paque或Percoll离心法分手出白血病细胞。3、洗涤细胞:用心理盐水洗涤细胞两次,以去除残留的血液成份和杂质。4、添加抗生素:将0.5μg/ml的gentamicin或kanamycin添加到培育基中,以避免细菌污染。5、分瓶培育:将洗涤后的细胞悬液插手到预先预备好的无菌试管中,每一个试管插手约100μl的细胞悬液。将试管标识表记标帜上患者的姓名和日期,并将它们放置在37°C、5%CO2的恒温培育箱中。6、细胞发展与传代:不雅察细胞的发展环境,当细胞密度到达80%时,需要进行传代。传代的方式是将细胞悬液转移到新的无菌试管中,每瓶插手10-20ml的新颖培育基,并在37°C、5%CO2的恒温培育箱中继续培育。4、利用KG-1A人急性骨髓白血病细胞系可以用在KG1a耐药细胞的构建和其经由过程sEVs改变受体细胞耐药性的研究:经由过程地西他滨梯度引诱构建了一株耐受地西他滨的KG1a(急性髓系白血病细胞),以下简称KG1a-DAC。经由过程检测KG1a和KG1a-DAC的IC50,和地西他滨对KG1a和KG1a-DAC增殖能力和细胞活力的影响。成果注解成功构建了KG1a-DAC(KG1a-DAC比KG1a对地西他滨的IC50>=10)。接着,本论文以KG1a和KG1a-DAC为尝试对象,研究KG1a-DAC是不是影响KG1a对地西他滨的敏感性。首要尝试成果以下:(1)与KG1a-DAC共培育可以下降KG1a对地西他滨的敏感性。而且雷火电竞网站发现KG1a-DAC来历的前提培育基也能够下降KG1a对地西他滨的敏感性。(2)用KG1a-DAC来历的sEVs处置KG1a后,尝试成果注解KG1a-DAC来历的sEVs能显著下降KG1a对地西他滨的敏感性。(3)共培育后的KG1a中地西他滨代谢相干卵白ENT1,DCK,CDA卵白没有显著转变,可是抑癌基因P15INK4B显著下降。用KG1a-DAC来历的sEVs处置KG1a,尝试成果注解KG1a-DAC来历的sEVs能按捺地西他滨引诱KG1a中P15INK4B表达。且经由过程GW4869按捺sEVs的排泄阻碍了KG1a-DAC对KG1a的影响,进一步证实KG1a-DAC首要经由过程sEVs按捺KG1a中P15INK4B表达,削弱其对地西他滨的敏感性。(4)经由过程miRDB,miRWalk,targetscan数据网站猜测,和RT-qPCR验证判定出雷火电竞官网入口KG1a-DAC来历的sEVs包括靶向P15INK4B基因的miR-323b-5p。经由过程向KG1a中瞬时转染miR-323b-5p inhibitor后与KG1a-DAC共培育,再检测KG1a中P15INK4B的表达,尝试证实miR-323b-5P的靶基因是P15INK4B。(5)向KG1a中瞬时转染miR-323b-5p inhibitor后与KG1a-DAC共培育,随后经由过程CCK8检测KG1a的活力,成果证实miR-323b-5p inhibitor能阻断共培育影响KG1a对药物的敏感性。综上发现KG1a-DAC经由过程sEVs传递miR-323b-5p,从而按捺KG1a中P15INK4B的表达,以此下降KG1a对地西他滨的敏感性。北京百欧博伟生物手艺有限公司具有对菌种、细胞、培育基、配套试剂等产物需求者的极优良办事,对采办项目标前期资料供给,中期合同包管,后期货色跟踪到终究售后简直保项目正确到位,都有相干人士进行保护,确保您在微生物菌种查询网中取得最优良办事!也正由于此,北京百欧博伟生物手艺有限公司与国表里多家研制单元、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着杰出、持久和不变的合作关系!下载附件-雷火电竞网站



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