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雷火亚洲电竞平台官网-人BURKITT'S淋巴瘤细胞的培养操作步骤及应用!

2023-09-30


1、布景人BURKITT'S淋巴瘤细胞是由E·Klein和G·Klein在1967年5月从一名16岁黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者成立的。Daudi细胞概况免疫球卵白阳性(sIg+)、Β2-微球卵白阴性,EBNA阳性,并有衣壳抗原VCA;Daudi细胞携带EB病毒。Daudi细胞是典型的B淋巴母细胞,普遍利用在白血病产生机理的研究。2、人BURKITT'S淋巴瘤细胞培育操雷火电竞网站官网入口作1)苏醒人BURKITT'S淋巴瘤细胞:以下细胞培育冻存处置仅供参考,具体操作步调以随货产物仿单为主将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇摆解冻,加4 mL培育基夹杂平均。在1000 rpm前提下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培育基后轻轻吹匀。然后将所有细胞悬液插手含适当培育基的培育瓶中培育留宿(或将细胞悬液插手6 cm皿中,插手约4 mL培育基,培育留宿)。第二天换液并查抄细胞密度。2)人BURKITT'S淋巴瘤细胞传代:假如细胞密度达80%-90%,便可进行传代培育。方式一:搜集细胞,1000RPM前提下离心3-5min分钟,弃去上清液,补加1-2ml培育液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培育基的新皿中或瓶中。方式二:可选择对折换液体例,弃去对折培育基后,将残剩细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培育基的新皿中或瓶中。3)人BURKITT'S淋巴瘤雷火app细胞冻存:待细胞发展状况杰出时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;a、搜集细胞和细胞培育液,装入无菌离心管中,1000 rpm前提下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。b、按照细胞数目插手无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,留意冻存管做好标识。c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌贮存。记实冻存管位置以便下次拿取。3、利用人BURKITT'S淋巴瘤细胞可以用在DAPT影响Burkitt's淋巴瘤细胞株(Raji细胞)的Notch旌旗灯号通路领会Raji细胞内Notch旌旗灯号通路激活环境;摸索DAPT对Raji细胞保存的影响和其对Raji细胞Notch份子的感化;切磋在Raji细胞中Notch份子对NF-κB旌旗灯号通路的影响,进一步熟悉Notch和NF-κB旌旗灯号通路之间的彼此感化。方式:以正常人外周血单个核细胞(PBMC)为阴性对比,T-ALL细胞株Jurkat细胞为阳性对比,操纵Western blot检测Raji细胞Notch1 transmembrane subunit(NTM)卵白程度,q RT-PCR检测Notch1下流靶份子Hes1的转录程度;分歧浓度DAPT感化Raji细胞后,操纵CCK-8法检测Raji细胞增殖环境;DAPT感化Raji细胞48h后,操纵流式细胞术检测细胞周期和其细胞凋亡环境;DAPT感化Raji细胞48h后,操纵q RT-PCR检测Notch1、Hes1、c-myc、p65、p50 m RNA的改变,操纵Western blot检测NTM卵白程度转变,Rel A(p65)、p50在胞浆和胞核卵白程度转变。成果:1、Western blot成果显示,比拟正常人外周血单个核细胞(PMBC),Raji细胞可检测到较高的NTM卵白,但两者均低在阳性对比Jurkat细胞;q RT-PCR成果提醒,与正常对比比拟,Raji细胞和Jurkat细胞内表达高程度的Hes1 m RNA;2、DAPT感化Raji细胞后,其增殖遭到按捺,且跟着浓度的增添和感化时候的耽误,按捺感化较着加强;3、DAPT能增进Raji细胞凋亡比例增多;4、DAPT感化后,Raji细胞增殖阻滞在S期;5、DAPT感化Raji细胞后,Western blot成果显示NTM的卵白程度轻度升高;6、DAPT感化Raji细胞后,胞核内的p50和p65卵白程度均增高,c-myc的m RNA程度增高。结论:1、Raji细胞表达较高的NTM卵白和Hes1 m RNA;2、DAPT可按捺Raji细胞增殖、增进细胞凋亡和促使细胞增殖阻滞在S期;3、上述现象可能的机制是DAPT按捺NTM卵白的酶切从而下调Hes1 m RNA的表达,同时加强NF-κB的活性。北京百欧博伟生物手艺有限公司具有对菌种、细胞、培育基、配套试剂等产雷火电竞官网入口物需求者的极优良办事,对采办项目标前期资料供给,中期合同包管,后期货色跟踪到终究售后简直保项目正确到位,都有相干人士进行保护,确保您在微生物菌种查询网中取得最优良办事!也正由于此,北京百欧博伟生物手艺有限公司与国表里多家研制单元、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着杰出、持久和不变的合作关系!下载附件-雷火电竞网站



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