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雷火亚洲电竞平台官网-RENCA小鼠肾癌细胞的接种和培养及应用!

2023-11-08


1、布景RENCA小鼠肾癌细胞是不法则没有显著角质化的侵染性鳞状细胞癌。单层培育的细胞间可以不雅察到带状毗连,也留意到有细胞质张力丝。1970年发现支原体污染并去除。肿瘤坏死因子(TNF)α按捺ME-180的发展。这株细胞含有人乳头瘤病毒(HPV)DNA,与HPV-39的同源性高在HPV-18。小鼠肾癌细胞Renca提取在人淋凑趣组织,原代冻存。每管含有细胞数>5×10 5cells/ml,此细胞经由过程vWF/Factor VIII和CD31(P-CAM)免疫荧光染色验证,经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。RENCA小鼠肾癌细胞形态:贴壁细胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)细胞检测:细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌培育前提:RPMI-1640+10%FBS;37℃,5%CO2传代方式:初次建议1:2-1:3两天换液一次冻存前提:90%FBS+10%DMSORenca小鼠肾癌细胞接种和培育:1)包被液:用去离水配制0.5%明胶溶液,过滤除菌。2)培育瓶包被:取2-4个T25培育瓶,每一个培育瓶加2-3ml0.5%明胶溶液,摇匀使包被液布满培育瓶底面,置37℃2小时或放置留宿。3)接种细胞:接种前吸净包被液,按2500-5000个细胞/cm接种细胞(1支5×10个细胞可接种2-4个培育瓶),每瓶加培育液3-5ml,摇匀后置37℃5%CO2培育箱内培育24小时,此时细胞已完全贴壁,改换培育液后继续在37℃5%CO2培育箱内培育。4)扩年夜培育:一般每周改换培育液2次,至细胞长至笼盖培育面的7雷火app官网下载雷火app官网0-80%可进行传代或冻存。留意事项:①传代培育时留意无菌操作并避免细胞间的交叉污染。所有操作尽可能接近酒精灯火焰。每次*好只进行一种细胞的操作。每种细胞利用一套器材。②RenCa:小鼠肾癌细胞天天不雅察细胞形态,把握好细胞是不是健康的尺度:健康细胞的形态丰满,折光性好,发展致密时便可传代。③如发现细胞有污染迹象,应当即采纳办法,一般应弃置污染的细胞,假如必需拯救,可加含有抗生素的BBS或培育基频频清洗,随后培育基中插手较年夜量的抗生素,并常常改换培育基。2、利用RENCA小鼠肾癌细胞可用在按捺剂对小鼠肾癌凋亡的感化和其机制研究:研究Babl/c小鼠Renca异位肾癌模子经IL-2和COX-2按捺剂NS-398感化的肿瘤发展环境、CD4+CD25+Foxp3+调理性T细胞(Treg)在荷瘤小鼠外周血、脾脏和肿瘤局部中的转变,切磋COX-2按捺剂加强肾癌免疫医治的感化和机制,为COX-2按捺剂辅助医治肾癌的临床利用供给尝试根据。方式:1.以小鼠Renca细胞株异位接种在Babl/c小鼠,成立小鼠Renca异位肾癌模子。2.随机分成四组,分歧组别采纳分歧给药方式,即A组为IL-2组,B组为NS-398组,C组为IL-2+NS-398组,D组雷火app下载官网为PBS空白对比组。3.别离在给药第14天和第28天提取各组荷瘤小鼠外周血,用流式细胞术检测Treg的转变。4.切取荷瘤小鼠瘤体和脾脏,应用免疫组化(immunohistochemistry,IH)方式检测小鼠脾脏和肿瘤局部的Treg的转变。成果:1、小鼠莳植瘤体经HE染色病理查抄,显微镜下可见年夜量异型细胞并见核割裂相,肿瘤细胞呈圆形、棱形或不法则形,细胞体积较年夜,细胞质较少,核年夜、深染,细胞摆列杂乱,可见实体样布局,间质少,呈浸润性发展,四周无包膜布局证实Babl/c小鼠莳植瘤体合适异位肾癌特点,可使用Babl/c小鼠来历的肾癌细胞株(Renca)成立小鼠异位肾癌模子。2、Babl/c小鼠异位肾癌在分歧药物处置后肿瘤体积呈现较着转变,A组经IL-2医治后10天内肿瘤体积仍有迟缓增加,16天后瘤体最先减小,减小幅度较年夜;B组单用NS-398,肿瘤仍在增加,但较对比组增加较慢;C组为结合用药组,肿瘤在第六天呈现减小,随后一向延续到尝试竣事,经多组t查验,与其他组具有统计学差别(P<0.05)。3、COX-2按捺剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤和脾脏中Treg的表达,且与IL-2结合有协同感化(P<0.05)。结论:1、利用Babl/c小鼠来历的Renca细胞成立Babl/c小鼠异位肾癌模子可作为研究小鼠肾癌的肿瘤模子。2、COX-2按捺剂结合IL-2可显著显著按捺荷瘤小鼠异位肾癌的发展。3、COX-2按捺剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤和脾脏中Treg的表达,Treg的下调是按捺肾癌发展的机制之一。4、IL-2结合利用COX-2按捺剂可以作为Babl/c小鼠异位肾癌免疫医治的辅助用药。北京百欧博伟生物手艺有限公司的微生物菌种查询网供给微生物菌种收藏、测序、采办等办事,是中国微生物菌种收藏中间的办事平台,而且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培育基为一体的年夜型微生物查询类网站,自设装备和手艺的微生物菌种收藏中间!接待泛博客户来询!-雷火电竞网站



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